Production and evaluation of egg derived hot start antibodies

BACKGROUND: Hot start can greatly improve specificity, sensitivity and yield of PCR. Non-specific amplification can occur in PCR when reaction mixture is prepared at room temperature, because Taq DNA polymerase is active and the primers can hybridize non-specifically. Hot start Taq DNA polymerases remain inactive at room temperature and are activated after heating at 95°C preventing non-specific amplification. Monoclonal antibodies against Taq DNA polymerase is the first line of reagents used for turn on regular Taq DNA polymerase into Hot start one. The goal of this research was to produce and evaluate Hot Start antibodies derived from chicken eggs. RESULTS: We performed affinity purification of yolk immunoglobulin (IgY) and obtained polyclonal Hot Start antibodies. The yield of specific antibodies was 0.36 mg per egg or 0.2% of total yolk antibodies. The protocol for real time measurement and Hot start IgY activity assessment was developed. We found that Hot start IgY can reversibly block Taq DNA polymerase activity at 50°C and have no negative impact neither on the Taq DNA polymerase activity after denaturation nor on the reverse transcriptase. We estimated that 1.0 µg of Hot start IgY effectively blocks 5 U activity of Taq DNA polymerase. CONCLUSIONS: Egg derived Hot Start polyclonal antibodies are the cheapest source of Hot start antibodies, from one immune egg we can isolate 0.36 mg IgY, this quantity is enough for producing 1800 U activity of Hot start Taq DNA Polymerase.

Effect of alliums on total lipid in plasma and tissues of Japanese quails (Coturnix coturnix japonica) with respect to age and sex.

Dietary onion and garlic caused an increase in the level of liver and plasma total lipids in Coturnix coturnix japonica. This increase could be due to the effect of an increased feed intake, bile production, digestion and absorption that in turn caused an increased utilisation of dietary fat, increased transfer of dietary lipids to the liver and/or due to increased lipogenesis as such. However, there was no increase in the muscle lipid content. This effect in the muscle could be due to inhibitory effect of onion or garlic on lipoprotein lipase activity. Further, the changes in the tissue total lipid level in the control group due to change in age and sex were also observed.

Efecto de la sustitución de yema de huevo por albúmina sérica bovina, suero equino o suero bovino en el diluyente de congelación sobre la viabilidad posdescongelación del espermatozoide equino / Effects of the substitution of bovine serum albumin, equine serum or bovine serum in the freezing extender on posthawed viability of equine sperm

Se colectaron 14 eyaculados equinos, de cada uno de ellos, previa centrifugación, se obtuvieron 7 alícuotas que fueron incorporadas a los diluyentes de congelación, cuya base general no difiere de ninguno de los tratamientos estudiados, excepto en el componente proteínico, ya que en el grupo testigo se utilizó la yema de huevo al 20 por ciento (YH), la cual se sustituyó, en los grupos experimentales por suero equino al 3 por ciento (SE3), suero equino al 6 por ciento (SE6), suero bovino al 3 por ciento (SB3), suero bovino al 6 por ciento (SB6), albúmina sérica bovina al 2 por ciento (AS2) o albúmina sérica bovina al 3 por ciento (AS3). El proceso de congelación-descongelación fue el mismo para todos los tratamientos. Se utilizó el sistema PAS (Programa para Análisis de Semen) con el fin de evaluar la motilidad, velocidad y linealidad del recorrido de las muestras en posdescongelación. En general se notó un efecto detrimental considerable de todos los sustitutos al momento de la descongelación ya que sólo el 46 por ciento de las muestras en estudio tuvieron viabilidad detectable por la computadora. En cambio, todas las muestras testigo (YH) se pudieron analizar. La motilidad no presentó diferencias entre los tratamientos, a excepción del diluyente SB6 con 36 ñ 5 por ciento vs el diluyente SB3 con 14 ñ 4 por ciento (P< 0.01). En cuanto a la motilidad también analizada visualmente, se encontró que el diluyente YH resultó ser el de mayor motilidad, 30 ñ 3 por ciento, y el SB3 y SE6 los de menor motilidad con 13 ñ 3 por ciento (P< 0.001). El diluyente YH presentó el mejor índice de velocidad con 64 ñ 2 µm/seg, y el SB3, SB6 y SE3 con 49, 45 y 52 µm/seg respectivamante, como los de manor velocidad (P< 0.001). La linealidad resultó mejor para el diluyente YH y SB6 que para los demás diluyentes (P< 0.001). Se concluye que el uso de la yema de huevo en el diluyente de congelación de semen equino provee una mejor protección al espermatozoide ante dicho proceso, que los sueros de equino y bovino y la albúmina sérica bovina